TEKNIK BLOK SEL

BLOK SEL

PENDAHULUAN

Tekhnik blok sel atau bahan yang berasal dari cairan dibuat embedding paraffin merupakan metode lama untuk pembuatan sediaan mikroskopik. Metode ini menggunakan tekhnik prosesing histologi dan salah satu keuntungannya dapat diproses dengan pewarnaan rutin, seperti hematoksilin dan eosin, dan pewarnaan khusus imunositokemistri, identifikasi musin, melanin, atau produksi sel lainnya, dan identifikasi bakteri dan jamur ^(1,2).

Pembuatan sediaan blok sel telah lama ditinggalkan dibeberapa laboratorium. Sel blok dilakukan dengan menggunakan bahan sisa dari pembuatan sediaan sitologi. Bahan sisa ini sering sekali memberikan nilai diagnostik. Richardson et al (1995) berpendapat bahwa dengan melakukan blok sel akan memberikan nilai tambah untuk mendiagnosa suatu kanker mencapai 5% jika sediaan smear disertai dengan pembuatan blok sel. Nilai tambah dari pembuatan blok sel adalah dapat mengetahui gambaran histologi dari suatu penyakit yang kadang-kadang tidak dapat teridentifikasi dari sediaan smear atau sediaan filter. Blok sel adalah prosedur yang perlu dilakukan untuk evaluasi hasil sitologi ^(1,2).

Beberapa laboratorium menganjurkan untuk membuat blok sel dari semua sediaan aspirasi biopsi. Dari sediaan blok sel dapat diperoleh gambaran arsitektur yang lebih baik dan dapat dijadikan panel kontrol untuk immune markers. Tetapi banyak menghabiskan waktu dan mahal dibandingkan dengan smears  rutin, untuk itu penggunaan blok sel dilakukan secara selektif, terutama jika memerlukan imunositokemistri. Menurut pengalaman kami, blok sel sangat bermanfaat jika sediaan yang diperoleh banyak mengandung campuran darah ⁽³⁾.

Sediaan yang diperoleh dari aspirasi jarum halus, sputum, cairan efusi pleura, sedimen urine, saluran cerna, washing, brushing, dapat diproses untuk pembuatan sediaan blok sel ^(1,2).

Menurut pengalaman kami, fiksasi terbaik digunakan untuk sediaan blok sel adalah Bouin’s atau asam pikrik ^(1,2). Tetapi, secara praktis fiksasi dengan menggunakan buffer formalin dipergunakan secara luas ^(1,2,4). Fiksasi dengan buffer formalin sering sekali mempercepat timbulnya endapan coklat ⁽²⁾.

CARA PEMBUATAN BLOK SEL ⁽⁵⁾

Bahan

      Sentrifuge

      Tabung sentrifuge 10 ml

      2% gelatin dimasukkan ke tabung gelas kemudian dicelupkan ke tabung yang berisi air mendidih sampai cair

      Pipet glass (heated glass pipet) untuk memindahkan gelatin panas

      10% buffer formalin netral

      Etil alkohol

      Xylene

      Paraffin

Prosedur

1. Sentrifuge sediaan sampai berbentuk ”pellet”
2. Tuangkan supernatan
3. Tambahkan kira-kira 0,25 ml gelatin 2% panas secara hati-hati dan dengan menggunakan stik aplikator ambil pellet sehingga gelatin menutupi pellet
4. Letakkan tabung ke kulkas untuk mempercepat gelatin menjadi solid
5. Keluarkan gelatin dengan stik aplikator dan letakkan ke dalam formalin
6. Fiksasi minimal 1 jam
7. Proses seperti sediaan jaringan untuk proses embedding paraffin

Tekhnik Blok Sel Yang Disederhanakan ⁽¹⁾

Tahun 1988, Krogerus dan Anderson memperkenalkan cara sederhana untuk pembuatan sediaan blok sel dari bahan yang diperoleh dari aspirasi jarum halus, brushing dan efusi. Merupakan teknik khusus dimana pada prosedur ini mengambil semua sampel dari tabung, memastikan sedikit sel yang hilang. Tidak perlu memindahkan sel ke cassette, tidak memerlukan kertas pembungkus, agar, atau trombin. Prosedurnya adalah:

1. Plastik ukuran 50 ml, tabung sentrifuge berbentuk kerucut, masukkan sampel kedalam alkohol 50% selama 1 jam
2. Putar sampel pada 300 gr selama 7 menit dan tuangkan supernatan
3. Masukkan sel pellet kedalam 3 ml aseton  selama 10 menit
4. Putar sampel pada 300 gr selama 10 menit. Tuangkan aseton
5. Letakkan tabung selama 1 hari pada temperatur hangat (tidak boleh > 60 °C)
6. Tambahkan melted paraffin sampai kering, hangatkan pellet
7. Setelah paraffin menjadi solid, balikkan dasar tabung untuk mengeluarkan blok
8. Proses sediaan blok sama seperti proses pembuatan sediaan jaringan lainnya.

Prosedur dehidrasi blok sel ^(1,2)

Metode dehidrasi blok sel dapat dilakukan sesuai dengan dehidrasi paraffin pada jaringan lainnya. Laboratorium histologi biasanya melakukan blok sel. Tetapi jika pemeriksaan ini tidak tersedia, prosedur dehidrasi dan embedding dibawah ini dapat dilakukan ;

1. 70% Alkohol (ethyl)   1 jam
2. 95% Alkohol (ethyl)   1 jam
3. 95% Alkohol (ethyl)   30 menit
4. 95% Alkohol (ethyl)   30 menit
5. Alkohol absolut          1 jam
6. Alkohol absolut          1 jam
7. Alkohol absolut          1 jam
8. Xylol                         1 jam
9. Xylol                         1 jam
10. Paraffin                     2 jam
11. Paraffin                     minimal 2 jam

Embedding dengan menggunakan clean paraffin, trim blocks, ukuran potongan blok paraffin 4-6 µm, dan mounting slide sesuai dengan teknik pembuatan sediaan histologi.

Cara Pembuatan Blok Sel di Laboratorium Patologi Anatomi SANDIA di R.S Bandung Internasional Hospital ⁽⁶⁾ :

1. Sediaan yang akan diperiksa di vortex terlebih dahulu.

Gunanya: sediaan yang dikirim biasanya telah terbentuk endapan sehingga perlu dimikser agar cairan menjadi homogen

2. Cairan yang akan diperiksa dimasukkan ke tabung reaksi secukupnya, kemudian di sentrifuge dengan kecepatan 4000 rpm selama 15 menit
3. Setelah itu akan diperoleh endapan, cairan (supernatan) dibuang
4. Endapan yang diperoleh difiksasi dengan menggunakan alkohol 96% selama 30 menit
5. Setelah itu cairan fiksasi dibuang dan endapan dimasukkan ke kertas saring
6. Proses sesuai dengan teknik sediaan histologi